HPLC常见问题和解决方法总汇
 
压力异常
 
操作压力的变化往往是故障的征兆。从下表中找出所观察到的现象，并在右侧的列表中参考相应的解决方法。
 

A、        没有压力显示，没有流动相流动

原 因	解决方法
1、电源问题	1、接通电源，开机
2、保险丝被烧坏	2、更换保险丝
3、控制器设定不正确或设定失败	3、a、采取恰当的设定 b、修理或更换控制器
4、柱塞杆折断	4、更换柱塞杆
5、泵头内有空气	5、溶剂脱气、启动泵抽出空气
6、流动相不足	6、a、补充流动相 b、更换入口滤头
7、单向阀损坏	7、更换单向阀
8、漏液	8、拧紧或更换手紧接头

 

B、         流动相流动正常，但没有压力显示

原 因	解决方法
1、仪表损坏	1、更换仪表
2、压力传感器损坏	2、更换压力传感器

 

C、        压力持续偏高

原 因	解决方法
1、流速设定过高	1、调整流速设定
2、柱前筛板堵塞	2、a、在允许情况下反冲色谱柱 b、更换筛板 c、更换色谱柱
3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀	3、a、使用恰当的流动相 b、冲洗色谱柱
4、色谱柱选择不当	4、选择恰当的色谱柱
5、进样阀损坏	5、清洗或更换进样阀
6、柱温过低	6、提高温度
7、控制器失常	7、修理或更换控制器
8、保护柱阻塞	8、清洗或更换保护柱
9、在线过滤器阻塞	9、清洗或更换在线过滤器

 

D、        压力持续偏低

原 因	解决方法
1、流速设定过低	1、调整流速
2、系统漏液	2、确定漏液位置并维修
3、色谱柱选择不当	3、选择恰当的色谱柱
4、柱温过高	4、降低温度
5、控制器失常	5、维修或更换控制器

 

E、         压力不断上升

原 因	解决方法
1、见列表C	1、见列表C

 

F、         压力降为零

原 因	解决方法
1、见列表A、B	1、见列表A、B

 

G、        压力不断下降，但不回零

原 因	解决方法
1、见列表D	1、见列表D

 

H、        压力波动

原 因	解决方法
1、泵中有气体	1、a、溶剂脱气 b、从泵中除去气体
2、单向阀损坏	2、更换单向阀
3、泵密封损坏	3、更换泵密封
4、脱气不充分	4、a、溶剂脱气 b、改变脱气方法（使用在线脱气法等）
5、系统漏液	5、确定漏液位置并维修
6、使用梯度洗脱	6、由于流动相粘度的变化引起的压力波动

 
漏  液
 
    通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题，就必须将接头取下，检查是否损坏（例如，卡套损坏、密封表面有杂质）；损坏的接头应该更换掉。
 

A、        接头处漏液

原 因	解决方法
1、接头松动	1、拧紧
2、接头磨损	2、更换
3、接头过紧	3、a、拧松，再重新拧紧 b、更换
4、接头被污染	4、a、拆下清洗 b、更换
5、部件不匹配	5、使用同一品牌的配件

 

B、         泵漏液

原 因	解决方法
1、单向阀松动	1、a、拧紧单向阀（不必拧的过紧） b、更换单向阀
2、接头松动	2、拧紧接头（不必拧的过紧）
3、混合器密封损坏	3、a、更换混合器密封 b、更换混合器
4、泵密封损坏	4、维修或更换泵密封件
5、压力传感器损坏	5、维修或更换压力传感器
6、脉冲阻尼器损坏	6、更换脉冲阻尼器
7、比例阀损坏	7、a、检查隔膜，如果漏液立即更换 b、检查手紧接头，损坏的立即更换
8、放空阀的损坏	8、a、拧紧放空阀 b、更换放空阀

 

C、        进样阀漏液

原 因	解决方法
1、转子密封损坏	1、重新安装或更换进样阀
2、定量环阻塞	2、更换定量环
3、进样口密封松动	3、调整
4、进样针头尺寸不合适	4、使用恰当的进样针
5、废液管中产生虹吸	5、保持废液管高于废液液面
6、废液管阻塞	6、更换或疏通废液管

 

D、        色谱柱漏液

原 因	解决方法
1、尾端接头松动	1、拧紧接头
2、卡套内有填料	2、拆下、清洗卡套、重新安装
3、筛板厚度不合适	3、使用合适的筛板（参考下表）

 
筛板选择指导

物质粒径	筛板孔径
3-4u	0.5u
5-20u	2u

 

E、         检测器漏液

原 因	解决方法
1、流通池垫片损坏	1、a、避免过大的背景压力（压力降） b、更换垫片
2、流通池窗破碎	2、更换窗口
3、手紧接头漏液	3、拧紧或更换
4、废液管阻塞	4、更换废液管
5、流通池阻塞	5、重新安装或更换

 
 
液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。

 

A、        峰拖尾

原 因	解决方法
1、筛板阻塞	1、a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱
2、色谱柱塌陷	2、填充色谱柱
3、干扰峰	3、a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱
4、流动相PH选择错误	4、调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰
5、样品与填料表面的溶化点发生反应图	5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂 b、更改色谱柱

 

B、         峰前延

原 因	解决方法
1、柱温低	1、升高柱温
2、样品溶剂选择不恰当	2、使用流动相作为样品溶剂
3、样品过载	3、降低样品含量
4、色谱柱损坏	4、见A1、A2

 

C、        峰分叉

原 因	解决方法
1、          保护柱或分析柱污染 图	1、取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。
2、样品溶剂不溶于流动相	2、改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。

 

D、        峰变形

原 因	解决方法
1、样品过载	1、减少样品载量

 

E、         早出的峰变形

原 因	解决方法
1、样品溶剂选择不恰当	1、a、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂

 

F、         早出的峰拖尾程度大于晚出的峰

原 因	解决方法
1、柱外效应	1、a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路） b、使用小体积的流通池

 

G、        K’增加时，脱尾更严重

原 因	解决方法
1、二级保留效应，反相模式	1、a、加入三乙胺（或碱性样品） b、加入乙酸（或酸性样品） c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品） d、更换一支柱子
2、二级保留效应，正相模式	2、a、加入三乙胺（或碱性样品） b、加入乙酸（或酸性样品） c、加入水（或多官能团化合物） d、试用另一种方法
3、二级保留效应，离子对	3、加入三乙胺（或碱性样品）

 

H、        酸性或碱性化合物的峰拖尾

原 因	解决方法
1、缓冲不合适	1、a、使用浓度50-100mM的缓冲液 b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液

 

I、            额外的峰

原 因	解决方法
1、样品中有其他组份	1、正常
2、前一次进样的洗脱峰	2、a、增加运行时间或梯度斜率 b、提高流速
3、空位或鬼峰	3、a、检查流动相是否纯净 b、使用流动相作为样品溶剂 c、减少进样体积

 

J、           保留时间波动

原 因	解决方法
1、温控不当	1、调好柱温
2、流动相组分变化	2、防止变化（蒸发、反应等）
3、色谱柱没有平衡	3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱

 

K、        保留时间不断变化

原 因	解决方法
1、流速变化	1、重新设定流速
2、泵中有气泡	2、从泵中除去气泡
3、流动相选择不恰当	3、a、更换合适的流动相 b、选择合适的混合流动相

 

L、         基线漂移

原 因	解决方法
1、柱温波动。（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。）	1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器 图
2、流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）	2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。
3、流通池被污染或有气体	3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用盐酸）
4、检测器出口阻塞。（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）	4、取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。
5、流动相配比不当或流速变化	5、更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。
6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时	6、用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。
7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成	7、检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂
8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。	8、使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。
9、使用循环溶剂，但检测器未调整。	9、重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。
10、检测器没有设定在最大吸收波长处。	10、将波长调整至最大吸收波长处

 

M、       基线噪音（规则的）

原 因	解决方法
1、在流动相、检测器或泵中有空气	1、流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。
2、漏液 图	2、见第三部分。检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。
3、流动相混合不完全	3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂
4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）	4、减少差异或加上热交换器
5、在同一条线上有其他电子设备	5、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。
6、泵振动	6、在系统中加入脉冲阻尼器

 

N、        基线噪音（不规则的）

原 因	解决方法
1、          漏液 图	1、见第三部分。检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液。
2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成	2、检查流动相的组成。
3、流动相各溶剂不相溶	3、选择互溶的流动相
4、检测器/记录仪电子元件的问题	4、断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。
5、系统内有气泡	5、用强极性溶液清洗系统
6、检测器内有气泡	6、清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器
7、流通池污染（即使是极少的污染物也会产生噪音。）	7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池
8、检测器灯能量不足	8、更换灯
9、色谱柱填料流失或阻塞	9、更换色谱柱
10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常	10、维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置

 

O、        宽峰

原 因	解决方法
1、流动相组成变化	1、重新制备新的流动相
2、流动相流速太低	2、调节流速
3、漏液（特别是在柱子和检测器之间）	3、见section 3。检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。
4、检测器设定不正确	4、调整设定
5、柱外效应影响 a、柱子过载 b、检测器对反应时间或池体积响应过大 c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大 d、记录仪响应时间太长 图	5、 a、 小体积进样（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀释样品 b、减少响应时间或使用更小的流通池 c、 使用内径为0.007-0.01的短管路 d、减少响应时间
6、缓冲液浓度太低	6、增加浓度
7、保护柱污染或失效	7、更换保护柱
8、色谱柱污染或失效，塔板数较低	8、更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。
9、柱入口塌陷	9、打开柱入口，填补塌陷或更换柱子
10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰	10、选择其它类型的色谱柱以改善分离效果
11、柱温过低	11、提高柱温。除非特殊情况，温度不宜超过75℃
12、检测器时间常数太大	12、使用较小的时间常数

 

P、         分离度降低

原 因	解决方法
1、流动相污染或变质（引起, 保留时间变化）	1、重新配置流动相
2、保护柱或分析柱阻塞 图	2、去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞，可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏，建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。

 

Q、        所有的峰面积都太小

原 因	解决方法
1、检测器衰减设定过高	1、减少衰减的设定
2、检测器时间常数设定太大	2、设定较小的时间常数
3、进样量太少	3、增大进样量
4、记录仪连接不当	4、使用正确的连接

 

R、        所有的峰面积都太大

原 因	解决方法
1、检测器衰减设定过低	1、采取较大的衰减
2、进样过多	2、减少进样量
3、记录仪连接不正确	3、正确连接记录仪

 
 
以下问题在使用进样阀过程中有可能发生。

 

A、        手动进样阀，转动不灵

原 因	解决方法
1、转子密封损坏	1、更换或调整转子密封
2、转子太紧	2、调整转子的松紧度

B、         手动进样阀，载样困难

原 因	解决方法
1、进样阀安装不当	1、重新安装
2、定量环阻塞	2、清洗或更换定量环
3、进样器污染	3、清洗或更换进样器
4、管路阻塞	4、清洗或更换管路

 

C、        自动进样阀，不能转动

原 因	解决方法
1、无压力（或电源）	1、提供恰当的压力（电源）
2、转子太紧	2、调整转子的松紧度
3、进样阀安装不当	3、重新安装

 

D、        自动进样阀，其它问题

原 因	解决方法
1、阻塞	1、清洗或更换阻塞部件
2、机械故障	2、见随机维修手册
3、控制器故障	3、维修或更换控制器

 
 
由气味、景象和声音可以发现的问题
 
你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。你最好养成习惯，每天花上几分钟运用你的感官（除了味觉）来“感觉”你的液相色谱是否存在问题，这样可以帮助你迅速找到问题所在。例如：在你看到漏液之前，你可能首先闻到它的气味。大部分的问题是可以通过眼睛看到。

 

A、        溶剂的气味

原 因	解决方法
1、漏液	1、见section 3
2、溅出	2、a、检查废液瓶是否已满 b、找到溅出的部位并清洗干净

 

B、         热气味

原 因	解决方法
1、仪器过热	1、a、检查并调节通风设施 b、检查并调节温度设定 c、关掉仪器，查找维修手册

 

C、        读数不正常

原 因	解决方法
1、压力不正常	1、见section 2
2、柱温箱问题	2、 a、检查并调节设定 b、参照用户手册
3、检测器灯失效	3、更换灯

 

D、        灯警告

原 因	解决方法
1、压力超出极限值	1、 a、检查是否阻塞 b、检查并调节极限值的设定
2、其它警示灯	2、见用户手册

 

E、         警告音

原 因	解决方法
1、溶剂泄漏/溅出	1、找到并解决
2、其它警告音	2、见用户手册

 

F、         刺耳的短音或长音

原 因	解决方法
1、轴承失效	1、见用户手册
2、润滑不够	2、进行恰当的润滑
3、机械故障	3、见用户手册

 
  
常见故障及日常维护
下表中列出了液相色谱常见的一些问题，右侧中则列出的日常维护的方法可以减少问题出现的频率。括号中的数字是建议进行维护的时间间隔。用户手册则提供您更多的维护方法。
 
溶剂瓶

问 题	维 护
1、进口筛板阻塞	1、 a、更换（3-6个月） b、过滤流动相，0.5u滤膜
2、气泡	2、流动相脱气

泵

问 题	维 护
1、气泡	1、流动相脱气
2、泵密封损坏	2、更换（3个月）
3、单向阀损坏	3、过滤流动相，运用在线过滤，准备备用单向阀

进样阀

问 题	维 护
1、转子密封损坏	1、 a、不要拧的过紧 b、过滤样品

色谱柱

问 题	维 护
1、筛板阻塞	1、a、过滤流动相 b、过滤样品 c、运用在线过滤或保护柱
2、柱头塌陷	2、a、避免使用PH>8的流动相（针对大部分硅胶的柱子） b、使用保护柱 c、使用预柱（饱和色谱柱）

检测器

问 题	维 护
1、灯失效，检测器响应降低，噪音增大	1、更换（6个月）或准备备用灯
2、流通池有气泡	2、a、保持流通池清洁 b、池后使用反压抑制器 c、流动相脱气

一般

问 题	维 护
1、腐蚀/摩擦损坏	1、在不使用时保持系统缓冲液的清洁

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